条带糊、定量飘、重复性差——很多 Western Blot 的问题，根子在制样。G-Bioscience 以蛋白样品制备试剂起家，结合其产品线整理六个高频细节。
1. 裂解液按实验目的选。做全蛋白 WB 用含去垢剂的 RIPA 类即可；做膜蛋白、核蛋白要换专用提取体系；做磷酸化检测，缓冲体系里必须含磷酸酶抑制剂。
2. 抑制剂现用现加。蛋白酶/磷酸酶抑制剂加入裂解液后活性随时间衰减，冻融过的混合裂解液补加一次抑制剂更稳妥。
3. 粘稠样本别硬离心。核酸释放导致粘稠，超声或核酸酶处理后离心，蛋白回收率明显改善。
4. 定量方法与裂解液兼容。BCA 与 Bradford 对去垢剂和还原剂的容忍度不同，裂解液成分会干扰定量，建议用与样品同 buffer 做标准曲线。
5. 上样缓冲液还原要充分。含 DTT/β-巯基乙醇的 buffer 室温孵育即可，过度加热可能致高分子量蛋白断裂。
6. 分装冻存，杜绝反复冻融。制好的样品按单次用量分装，-80℃ 保存。
