细胞衰老研究近年持续升温——肿瘤治疗诱导的衰老、组织纤维化中的衰老细胞堆积、衰老细胞的"旁观者效应"，都让"如何严谨地证明细胞衰老了"成为高频问题。单靠一个指标容易翻车，建议三层证据组合。
第一层：酶活性。SA-β-gal（衰老相关 β-半乳糖苷酶，pH6.0）染色是形态学金标准，阳性细胞显蓝色。要点：pH 必须精确控制在 6.0（pH 4 的溶酶体 β-gal 会假阳性），细胞密度不宜过低，贴壁细胞固定后染色 12~16 小时观察。
第二层：分子标志物。p16Ink4a、p21、p53 上调，RB 通路激活；衰老相关异染色质聚焦（SAHF）可见。WB 或免疫荧光验证 2 个以上标志物同时变化，说服力显著提升。
第三层：功能与形态。细胞扁平增大、增殖停滞（EdU/BrdU 掺入阴性）、分泌表型（SASP 因子 IL-6、IL-8 升高）。
注意区分三种"不增殖"：静息态细胞 p16 不升、SA-β-gal 阴性；凋亡细胞核固缩、caspase 激活；只有衰老是"活着但永久停滞"。组合检测能明确区分三者。
Cell Biolabs 提供成套的细胞衰老检测试剂盒，染色液现配体系，省去自行配制的 pH 校准环节。
