配图：96 孔 ELISA 微孔板加样
ELISA 是定量免疫检测的主力，但对操作细节极其敏感。复孔差异大或与文献趋势不符时，按下面清单逐条自查。
1. 加样精度。建议使用多通道移液器，枪头校准；样本加样体积小（常为 10~50 μL），枪头外壁残留液滴即可造成明显误差。
2. 洗涤彻底性。洗板不净是背景偏高的首因，手洗每孔停留时间要一致，最后一次洗涤后孔内残液在吸水纸上扣干。
3. 孵育温度与时间。抗体孵育多为 37℃ 或室温，室温波动大的实验室建议恒温水浴/孵育箱，避免靠窗位置做板。
4. 试剂回温。试剂盒各组分使用前回温至室温并混匀，冷试剂直接加样会拉长反应时间差。
5. 边缘效应。板边缘孔蒸发快，标准曲线最好避开最外圈，或使用带盖保湿孵育。
6. 基质效应。血清/血浆样本基质复杂，必要时按说明书稀释后加样，用配套稀释液。
7. 操作节奏。多板并行时，加样—孵育—洗板各环节按板序推进，避免某板等待过久。
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