
修饰碱基掺入 DNA 双螺旋示意
做核酸标记,选对修饰核苷酸是第一步,也是最容易返工的一步。Jena Bioscience 的修饰核苷酸体系按"接头+标记物"设计,选型时先问自己三个问题。
一、标记物跟着下游应用走。做 pull-down、亲和纯化选生物素-NTP(链霉亲和素体系成熟);做探针、原位杂交、成像选荧光-NTP(按仪器通道选基团);要做二次标记、想要标记物间距更灵活,选氨基烯丙基-NTP(掺入后再偶联标记物,掺入效率通常高于大体积直接标记)。
二、标记密度要平衡。全替换式掺入(如全用 biotin-UTP)标记密度最高,但常显著抑制聚合酶活性、损伤产物功能;实践中多用"修饰:天然 = 1:3~1:10"的掺入比,在信号与活性之间找平衡。
三、聚合酶要兼容。大体积修饰碱基对聚合酶是负担,掺入效率因酶而异——换修饰 NTP 后先做小体系预试,别一上来就跑大批量。
站内功能基因组学栏目可检索各规格修饰核苷酸货号;不确定选哪种接头的,把下游应用告诉我们,技术支持帮你缩小范围。